فهرست مطالب
عنوان صفحه
خلاصه فارسی………………………………………………………………………………………………………………………………………. 1
مقدمه …………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 3
فصل اول: کلیات
1-1 تعریف بیماری لیشمانیوز…………………………………………………………………………………………………………… 6
1-1-2 تاریخچه لیشمانیوز در جهان………………………………………………………………………………………………… 7
1-1-3 تاریخچه لیشمانیوز در ایران………………………………………………………………………………………………….. 8
1-2 ردهبندی و طبقهبندی انگل لیشمانیا………………………………………………………………………………………… 9
1-3 مورفولوژی و سیر تکاملی انگل لیشمانیا…………………………………………………………………………………… 11
1-3-1-1 مورفولوژی انگل………………………………………………………………………………………………………………… 11
1-3-1-2 شکل بی تاژک (آماستیگوت یا جسم لیشمن)………………………………………………………………. 11
1-3-1-3 شکل تاژک دار (پروماستیگوت)………………………………………………………………………………………. 12
1-3-2-1 سیر تکاملی انگل………………………………………………………………………………………………………………. 15
1-3-2-2 سیر تکاملی انگل در بدن حشره……………………………………………………………………………………… 15
1-3-2-3 پشه خاکی…………………………………………………………………………………………………………………………. 15
1-3-2-4 سیر تکاملی انگل در بدن میزبان مهره دار……………………………………………………………………… 16
1-4 راههای انتقال لیشمانیا به انسان………………………………………………………………………………………………. 18
1-4-1 انتقال از طریق نیش پشه خاکی………………………………………………………………………………………….. 19
1-4-2 انتقال مکانیکی……………………………………………………………………………………………………………………… 19
1-4-3 انتقال از راه خون…………………………………………………………………………………………………………………… 19
1-4-4 انتقال مستقیم……………………………………………………………………………………………………………………….. 19
1-5 بیماریزایی لیشمانیا…………………………………………………………………………………………………………………… 20
1-5-1 خصوصیات بیماری لیشمانیا…………………………………………………………………………………………………. 19
1-5-2 لیشمانیوز احشایی…………………………………………………………………………………………………………………. 20
1-5-3 لیشمانیوز جلدی پس از کالاآزار (PKDL)……………………………………………………………………… 21
1-5-3-1 لیشمانیوز جلدی و اشکال بالینی آن………………………………………………………………………………. 22
1-5-3-2 لیشمانیوز جلدی خشک…………………………………………………………………………………………………. 22
1-5-3-3 لیشمانیوز جلدی مرطوب… 22
1-5-3-4 لیشمانیوز جلدی مزمن (Chronic Cutaneous Leisniasihmas)………………… 23
1-5-3-4-1 شکل لوپوئید یا عود کننده سالک (Lupoid or Recidivan form)…………….. 24
1-5-3-5 لیشمانیوز جلدی- مخاطی……………………………………………………………………………………………… 24
1-6 ایمنولوژی عفونتهای لیشمانیا…………………………………………………………………………………………………. 25
1-6-1 مشخصات ایمنولوژیکی در لیشمانیوز پوستی……………………………………………………………………. 25
1-6-1-1 نقش آنتی بادی یا ایمنی همورال…………………………………………………………………………………… 25
1-6-1-2 نقش ایمنی سلولی در لیشمانیوز جلدی………………………………………………………………………… 26
1-6-1-3 عمل سلولهای نوتروفیل و ماکروفاژ در لیشمانیوز………………………………………………………….. 26
1-6-1-3 عملکرد T-CELL……………………………………………………………… 27
1-6-2 مشخصات ایمنولوژیکی در لیشمانیوز احشایی…………………………………………………………………… 28
1-6-2-1 نقش ایمنی همورال در کالاآزار………………………………………………………………………………………. 28
1-6-2-3 نقش ایمنی سلولی در کالاآزار………………………………………………………………………………………… 28
1-6-2-4 .نقش مهم سلول های CD+4……………………………………………………. 29
1-7 روشهای تشخیص و مطالعه لیشمانیوز…………………………………………………………………………………….. 30
1-7-1 روشهای مستقیم تشخیص انگل…………………………………………………………………………………………… 30
1-7-1-1 . جداسازی انگل از کناره ضایعات پوستی یا بافتهای آلوده…………………………………………… 31
1-7-1-1 رنگ آمیزی……………………………………………………………………………………………………………………….. 31
1-7-1-2 کشت انگل………………………………………………………………………………………………………………………… 32
1-7-2 روشهای ایمنولوژی در شناسایی انگل………………………………………………………………………………… 32
1-7-2-1 آزمایشات سرولوژی برای بررسی ایمنی همورال…………………………………………………………… 32
1-7-2-2 آزمایشات ایمنولوژیکی جهت بررسی ایمنی سلولی………………………………………………………. 33
1-7-2-2-1 تستهای پوستی……………………………………………………………………………………………………………. 33
1-7-2-3 ماهیت پاسخهای ازدیاد حساسیت تاخیری (DTH)……………………………………………………. 34
1-7-3 آزمون پوستی لیشمانین یا تست مونتنگرو…………………………………………………………………………. 35
1-7-3-1 معرف آنتیژنی لیشمانین برای تست پوستی………………………………………………………………… 35
1-7-4 تست سنجش تکثیر لنفوسیتی ymphocyte proliferation test(L.T.T) …………………….. 37
فصل دوم : مروری بر متون گذشته
فصل سوم: مواد و روشها
3-1کشت انگل……………………………………………………………………………………………………………………………………. 43
3 -1-1 مواد مورد نیاز جهت کشت انگل……………………………………………………………………………………….. 43
3-1-2. وسایل مورد نیاز جهت کشت انگل……………………………………………………………………………………… 43
3-1-3. طرز تهیه محیط کشت مایع RPMI- 1640………………………………………………………………….. 44
3-1-4. طرز تهیه محیط کشت کامل……………………………………………………………………………………………….. 44
3-1-5. طرز تهیه محیط کشت NNN……………………………………………………… 44
3-1-6. طرز تهیه (PBS) Phosphate Buffered Saline…………………………….. 45
3-1-7. روش کشت انگل…………………………………………………………………………………………………………………… 45
3-1-8. روش شمارش سلولها……………………………………………………………………………………………………………. 46
3-1-8-1. مواد و وسایل لازم جهت شمارش انگل…………………………………………………………………………. 46
3-1-8-2. شمارش با لام نئوبار………………………………………………………………………………………………………… 46
3-2. جداسازی انگلها با limiting dilution assay………………………………………. 47
3-2-1. مواد و وسایل مورد نیاز برای Limiting dilution assay……………………….. 48
3-2-2. مراحل Limiting dilution assay……………………………………………… 48
3-3. تهیه کرایو برای ذخیره در بانک سلولی…………………………………………………………………………………… 50
3-3-1. مواد و وسایل لازم جهت تهیه کرایو……………………………………………………………………………………. 50
3-4 تهیه آنتیژن Freeze – thaw از انگلها جهت درهم ریختگی غشاء و بروز تمامی آنتیژنها…………….. 52
3-5 الکتروفورز آنتیژنهای پروتئینی در ژل پلیآکریلآمید ( SDS-PAGE )………………………. 53
3-5-1 اصول الکتروفورز در ژل پلیآکریلآمید……………………………………………………………………………….. 53
3-5-2 سیستم بافری………………………………………………………………………………………………………………………… 54
3-5-3 مواد و وسایل مورد نیاز برای SDS-PAGE…………………………………………………………………… 54
3-5-4 آمادهسازی نمونه……………………………………………………………………………………………………………………. 57
3-5-6 طرز تهیه بافر الکترود……………………………………………………………………………………………………………. 57
3-5-7. روش انجام SDS-PAGE………………………………………………………… 58
3-5-8 روش رنگآمیزی با کوماسی آبی R- 250………………………………………….. 59
مواد مورد نیاز رنگآمیزی کوماسی آبی R- 250:…………………………………………………………………………… 59
3-6 سنجش میزان پروتئین تام با Bradford assay…………………………………….. 60
3-6-1 مواد و معرفهای مورد نیاز تست Bradford………………………………………. 60
3-6- 2 روش کار سنجش پروتئین تام……………………………………………………………………………………………. 61
3-7 تست Lymphocyte transformation test (L.T.T)………………………….. 62
3-7-1 روش انجام تست L.T.T……………………………………………………………. 63
1-3-7-1. مواد و وسایل لازم جهت انجام تست L.T.T…………………………………….. 64
3-8 ایمنیزایی در خوکچه هندی…………………………………………………………………………………………………….. 66
...
پایان نامه درباره دفع آفات