چکیده
پیوند کلیه، درمان انتخابی برای بیماران مبتلا به مرحله نهایی بیماری کلیوی یا End Stage Renal Disease (ESRD) است. در بیماران پیوند کلیه “رد حاد پیوند کلیه” جدیترین عارضه محسوب میشود که در صورت تشخیص سریع، احتمالا برگشتپذیر خواهد بود. شواهد زیادی وجود دارد مبنی بر اینکه آسیب اکسیداتیو به عنوان فاکتور مهم در پیدایش و پیشرفت تعدادی از بیماریها از جمله سرطان، بیماریهای عصبی، دیابت و بیماری مزمن کلیوی نقش دارد. آنزیمهای NQO1 و کاتالاز ( CAT) از جمله آنزیمهای آنتی- اکسیدانت هستند، که از سلولها در برابر آسیب اکسیداتیو محافظت میکنند. هدف از این مطالعه، بررسی ارتباط چند شکلی ژنتیکی ژنهای CAT C-262TوNQO1 C609T با خطر رد حاد پیوند کلیه میباشد. در این مطالعه مورد-شاهدی 224 فرد سالم به عنوان گروه کنترل و 222 نفر بیماران پیوند کلیه شرکت داشتند. از روش PCR-RFLP جهت تعیین ژنوتیپ چند شکلیهای ژنتیکی استفاده کردیم. با توجه به نتایج بدست آمده ارتباط معنیداری بین فراوانی ژنوتیپها و آللهای ژن NQO1 در دو جمعیت سالم و بیماران پیوندی مشاهده نشد درنتیجه میتواند حاکی از این باشد که فراوانی ژنوتیپی و آللی ژن NQO1 در بروز بیماریهای کلیوی منجر به پیوند کلیه نقشی ندارد. در مورد ژن CAT از مقایسه ژنوتیپهای ژن کاتالاز در دو جمعیت سالم و بیمار اختلاف معنیدار فقط در ژنوتیپ CT این ژن مشاهده شد که این عامل میتواند در آسیبهای کلیوی که سبب نارسایی شدید کلیه و در نهایت منجر به پیوند میگردد نقش داشته باشد. (51/1=OR، 25/2=95%CI، 043/0=P) همچنین مقایسه فراوانی ژنوتیپی و آللی این دو ژن بین دو گروه بیماران با رد حاد و فاقد رد حاد پیوند انجام شد که در ژن CAT هیچ ارتباط معنیداری مشاهده نشد. (05/0<P) و در ژن NQO1 تنها در آلل T این ژن ارتباط در سطح معنی-داری مشاهده گردید. به این معنی که آلل T به میزان 64/1 برابر خطر رد حاد پیوند کلیه را افزایش میدهد.
(64/1 =OR، 73/2-99/0 = %95 CI، 05/0 =P)
کلید واژه: پیوند کلیه، رد حاد پیوند، CAT, NQO1
فهرست مطالب
عنوان صفحه
فصل اول: مقدمه
1.1- پیوند کلیه ……………………………………………………………………………………………………………………. 2
2.1- رد پیوند کلیه ………………………………………………………………………………………………………………. 4
3.1- رد حاد پیوند ……………………………………………………………………………………………………………….. 4
4.1- DGF ……………………………………………………………………………………………………………………………. 6
5.1- آنتی بادی های ضد HLA …………………………………………………………………………………………. 6
6.1- آنتی بادی علیه آنتی ژن های گروه خونی ……………………………………………………………….. 7
7.1- افزایش سن اهدا کننده و دریافت کننده پیوند ……………………………………………………….. 7
8.1- اهدا کننده بافت ………………………………………………………………………………………………………….. 8
9.1- استرس اکسیداتیو و آنتی اکسیدانتها …………………………………………………………………….. 8
10.1- کاتالاز ………………………………………………………………………………………………………………………… 9
11.1- NAD(P)H کوئینون اکسیدوردوکتاز1 ………………………………………………………………… 11
12.1- هدف…………………………………………………………………………………………………………………………. 12
13.1- فرضیه ……………………………………………………………………………………………………………………… 12
عنوان صفحه
فصل دوم: مروری بر تحقیقات پیشین
1.2- مطالعات انجام شده بر روی ژن کاتالاز …………………………………………………………………….. 14
2.2- مطالعات انجام شده بر روی ژن NQO1 ………………………………………………………………….. 16
3.2- مطالعات پیشین انجام شده در خصوص پیوند کلیه ………………………………………………. 18
فصل سوم: مواد و روش ها
1.3- نمونهگیری …………………………………………………………………………………………………………………. 20
2.3- وسایل مورد نیاز …………………………………………………………………………………………………………. 21
3.3- محلولهای استفاده شده جهت استخراج DNA از نمونه خون کامل ………………….. 21
4.3- محلولهای استفاده شده جهت استخراج DNA از نمونه بافیکت ………………………. 21
5.3- مواد لازم جهت انجام PCR ……………………………………………………………………………………… 22
6.3- مواد لازم جهت انجام الکتروفورز ……………………………………………………………………………… 22
7.3- مواد استفاده شده جهت اثر دادن آنزیم محدودکننده ……………………………………………. 22
8.3- استخراج DNA از خون محیطی …………………………………………………………………………….. 22
9.3- استخراج DNA از بافیکت با کیت DNP ……………………………………………………………… 23
10.3- PCR ……………………………………………………………………………………………………………………….. 24
11.3- الکتروفورز ………………………………………………………………………………………………………………… 27
12.3- رنگآمیزی ژل ………………………………………………………………………………………………………… 28
13.3- تحلیل آماری …………………………………………………………………………………………………………… 29
پایان نامه درباره دفع آفات